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倉鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒 使用目的: 為定量(性)測定活化的目標濃度的血清,血漿,組織勻漿,細胞培養上清及其他生物液體。研究使用不是用于診斷或治療程序。 如果你有任何問題,請上海義森生物科技有限(xian)公司。
更新時間(jian):2016-01-18
倉鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒
試劑盒組(zu)成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終(zhong)止液 | 3ml×1瓶 |
2 | 酶(mei)標試(shi)劑 | 3ml×1瓶 | 8 | 標準品(960μg/L) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶(mei)標包(bao)被板 | 12孔×4條 | 9 | 標(biao)準品(pin)稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 10 | 說(shuo)明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 3ml×1瓶 | 11 | 封(feng)板(ban)膜(mo) | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 3ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將(jiang)標本放于-20℃保存,但(dan)應(ying)避免反復凍(dong)融
2.不能檢(jian)測含NaN3的樣(yang)品(pin),因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準(zhun)(zhun)品的稀釋:本試劑盒提(ti)供原倍標準(zhun)(zhun)品一(yi)支,用戶可按照下列圖(tu)表在小試管(guan)中進行稀釋。
480μg/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
240μg/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
120μg/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
60μg/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
30μg/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加(jia)樣(yang)(yang):分別設空白孔(空白對照(zhao)孔不加(jia)樣(yang)(yang)品及酶標試劑,其余各步操作相同(tong))、標準孔、待測樣品(pin)孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品加(jia)于酶標板(ban)孔底部,盡量不(bu)觸(chu)及孔壁,輕輕晃動混勻(yun)。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分(fen)鐘。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭(jie)掉封板膜,棄去液體(ti),甩(shuai)干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每(mei)孔加終止液50μl,終止反應(此時藍(lan)色立轉(zhuan)黃色)。
11. 測定:以空白空調零(ling),450nm波長依序測量各孔的吸(xi)光度(OD值)。 測定應(ying)在(zai)加終止(zhi)
倉鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣(yang)品(pin)的實際濃(nong)度(du)。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液(ye)可能會有結晶(jing)析出,稀釋(shi)時可在水(shui)浴中加溫助溶,洗滌時不影響(xiang)結果(guo)。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只(zhi)限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
保存條件及有效(xiao)期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月